Mutacja w genie kodującym stymulujące białko G cyklazy adenylanowej w dziedzicznym osteodystrofii Albrighta ad 6

Natomiast linie komórkowe fibroblastów od dwóch niepowiązanych pacjentów z dziedziczną osteodystrofią Albrighta i niedoborem Gs. miały obniżone poziomy (40 do 60 procent prawidłowych) mRNA Gs. (Fig. 3, ścieżki 6 i 7). W linii komórkowej mysiego chłoniaka S49, w której genetycznie brakuje Gs., 27 nie wykryto mRNA Gs. – wynik zgodny z wynikami wcześniejszych badań28, 30 (ryc. 3). Figura 4. Figura 4. Analiza restrykcyjna-endonukleaza genu Gs.. Genomowy DNA trawiono Taql i hybrydyzowano z sondą genową Gs. 5,9 kb, jak opisano w Methods. Ścieżka przedstawia DNA od pacjenta; ścieżka 2, DNA od matki pacjenta; i ścieżki 3 i 4, DNA od normalnych osobników. Zgodnie z przewidywaniami z mapą fragmentów restrykcyjnych Taql w regionie eksonu genu Gs. (u dołu figury), fragmenty 0,56 kb i 0,34 kb wykryto u pacjentów z dziedziczną osteodystrofią Albrighta oraz u osób zdrowych, z wyjątkiem insercja małego genu jako podstawa nieprawidłowego fragmentu restrykcyjnego Ncol o wielkości 1,5 kb.
Ludzki gen Gs. składa się z 13 egzonów i 12 intronów, które są rozmieszczone w przybliżeniu na 20 kb DNA.31 Aby zidentyfikować zmiany w strukturze genu Gs., które mogą odpowiadać białku Gs. pozbawionemu reszt aminokwasowych kodowanych przez eksony i 2 przeanalizowaliśmy genomowy DNA od czterech normalnych osobników i Pacjentów I-2 i II-2, stosując endonukleazy restrykcyjne, które mają miejsca rozpoznawania w obrębie regionu 5 genu. Nie znaleziono nieprawidłowych fragmentów restrykcyjnych po trawieniu DNA pięcioma enzymami (KpnI, PvuII, PstI, EcoRI i BamHI) i hybrydyzowano z fragmentem EcoRI-XhoI o wielkości 860 bp ludzkiej 5 genomowej sondy Gs. (nukleotydy -1120 do -260). W przeciwieństwie do tego, trawienie za pomocą NcoI genomowego DNA od dwóch pacjentów powodowało nieprawidłowy wzór fragmentów restrykcyjnych. Oprócz fragmentu 1,0 kb obecnego w DNA od czterech normalnych osobników konsekwentnie identyfikowano nieprawidłowy fragment o długości 1,5 kb (Fig. 1). Ten fragment o długości 1,5 kb nie został znaleziony w DNA pochodzącym od nienaruszonego rodzeństwa (ryc. 1), 15 innych normalnych podmiotów i 7 innych pacjentów z niedoborem Gs. (dane nie przedstawione). Aby ocenić możliwość, że fragment 1,5-kb wynika z wstawienia fragmentu DNA o długości 0,5 kb pomiędzy miejsca restrykcyjne 5 i egzon dla Ncol, przeanalizowaliśmy wzór fragmentu restrykcyjnego wytworzony po trawieniu TaqI DNA z dwóch sekwencji. pacjenci. Oczekiwane fragmenty 0,34 kb, 0,56 kb i 1,4 kb charakterystyczne dla genu Gs. w regionie zawierającym dwa miejsca restrykcyjne Ncol (Fig. 4) były obecne w DNA od obu pacjentów, co wykluczało insercję w genie Gs.. jako podstawę dla obecności fragmentu NcoI o wielkości 1,5 kb (fig. 4).
Figura 6. Figura 6. Bezpośrednia analiza sekwencji genomowego DNA amplifikowana przez reakcję łańcuchową polimerazy. Autoradiograf z normalną sekwencją nukleotydową eksonu genu Gs. pokazano po prawej; sekwencja restrykcyjna Ncol, w tym kodon metioninowy inicjatora ATG, jest pokazana w obrębie klamry. Lewy panel pokazuje autoradiogram z odpowiednią sekwencją nukleotydową eksonu Gs. pacjenta z dziedziczną osteodystrofią Albrighta (proband)
[podobne: duomox angina, powiększone ślinianki, azitrolek opinie ]